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液相色谱仪在使用中产生气泡该怎么处理?
2020-04-16 13:36
  液相色谱仪适于分离生物、医学大分子和离子化合物,不稳定的天然产物,种类繁多的其它高分子及不稳定化合物。
  液相色谱仪在使用中整个液路系统有两个地方易产生气泡!
  1、泵头吸液白管。
  2、检测口流通池。
  气泡产生的原因:温度上升,压力下降!
  温度上升或柱温上升,当接近试剂沸点时,试剂汽化产生气泡,试剂中已含微小气泡,因加热变大而产生气泡。
  压力下降产生气泡,流动相中一直包含微小气泡,无论超声过滤,均不能池底去掉它,那么当压力下降时,微小气泡将长大,且多个小气泡易聚集成大气泡,而影响正常实验。
  下面分部位说明气泡产生原因及解决办法:
  一、泵头及吸液白管。
  1、泵头:泵头是压力变化最剧烈的地方,也是最易产生气泡的地方,泵头靠负压而吸液,而负压必然使流动相中的小气泡长大,当泵腔变正压时,已长大的气泡未必能全部变小流入后续液路,则泵腔内将积存气泡,从而影响吸液精度,鉴于此,泵头上专门设计了排气阀,便于泵头排气,观察柱压稳定了说明泵头排气成功。
  2、吸液白管长气泡。
  a、吸液白管接触空气部位漏气,产生可见气泡,吸液白管是常压和负压交臂变化部位,其漏表现为大气进入白管内,而不易见到管内液体漏出。
  处理方法:更换白管。
  b、滤头堵:滤头堵使得液体流入滤头的速度下降,泵强制吸液而产生真空气泡。
  判断:拔掉滤头不再长气泡则是滤头堵。
  处理:A、30%硝酸水液超洗滤头,20分钟左右。
  B、水超洗滤头,注意换水多超几次。
  c、流动相汽化产生气泡。
  尤其是夏天室温高,沸点低的试剂易汽化,比如:乙酸,氨水,石油醚等易于汽化。
  处理:超声,降室温。
  二、检测流通池长气泡。
  流通池是易积存气泡的地方,其对基线影响巨大,流动相流入色谱柱后,压力越来越小,微小气泡将逐渐长大,而流通池截面积远大于钢管面积,则气泡在池内易长大,气泡的特点是长大在无外压的情况下,很难缩小到钢管内经以下流出流通池,所以它就存在了池内。
  处理方法:1、对于示差检测器(示差检测器池只能耐几个公斤压力),只能是反复冲洗斥资,举高废液瓶靠废液管内液柱给池加一个微小反压,所以这就靠成了示差池子排气困难些,但无它法。
  三、紫外检测器池内气泡排除,当基线很乱,无规则时,应考虑池子排气泡。
  1、反复调节反压器压力,直至基线稳定。
  2、手工排气泡步骤。
  a、取下反压器,接上备用钢管。
  b 、泵吸液,检测器调零。
  c、在现柱压基础上加一个50KG压力上限保护,比如,现柱压60KG,pmax设压力上限110KG即可
  d、手堵废液钢管出液端,眼看泵柱压上升,且同时看检测器显示屏上AV值的变化。
  如果池内有气泡,则手堵废液管,AN值将剧烈变化,当手松开后AV值再次大步上升,证明池内有气泡但没有排掉,当手堵和松开废液管时,AV值基本不变时,证明排汽泡成功,再观察基线将稳定。
  四、池内有气泡,手堵废液管,AV值剧烈变负的原因解释,池内充满空气或液体时,光透过率均很高,但有汽泡时透过率很低,手堵废液管,池内气泡变小,光透过率加大,AV值剧烈变负。
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